Biologie moléculaire :
- Choix du plasmide de production
- Etiquette utilisée et sa position dans la séquence
- Optimisation des séquences pour éviter les codons rares
![Plasmid_opt](http://p2r-protein-facility.eu/wp-content/uploads/2018/11/Plasmide_opt-300x300.png)
![Structure_opt](http://p2r-protein-facility.eu/wp-content/uploads/2018/11/Structure_opt.png)
Expression de protéines :
- En bactéries Escherichia coli (BL21(DE3) pLysS, Rosetta, etc) :
- Sous forme soluble
- Sous forme de corps d’inclusion puis renaturation, notamment pour les CMH/peptide, MR1 et MicA
- En cellules eucaryotes stables ou transitoires de mammifères : CHO-K, CHO-S, ExpiCHO-S, HEK293, Expi293F
Purification de protéines ou peptides par chromatographie liquide :
- Exclusion stérique
- Echange d’ions
- Interactions hydrophobes
- Phase inverse
- Affinité
![NGC_Bio-rad_opt](http://p2r-protein-facility.eu/wp-content/uploads/2018/05/NGC_Bio-rad_opt-200x196.jpg)
![Limule_opt](http://p2r-protein-facility.eu/wp-content/uploads/2018/11/Limule_opt.png)
Endotoxines :
- Titration avec kit lysat d’amoebocytes de limule (LAL)
- Elimination par colonne d’affinité
Contrôles analytiques :
- Chromatographie d’exclusion stérique
- SDS-Page
- Stabilité thermique des protéines par nanoDSF (Prometheus NT.48)
- Criblage de conditions de stockage des protéines par nanoDSF (tampons, températures)
![Prometheus NT_opt](http://p2r-protein-facility.eu/wp-content/uploads/2020/05/Prometheus-NT_opt.png)